賽默飛色譜柱選擇時(shí)要掌握色譜柱的主要關(guān)鍵參數,色譜柱的保護,色譜分析理論以及色譜柱的分類(lèi)等知識,分析工作者才能做到在工作開(kāi)展時(shí)一針見(jiàn)血的選擇色譜柱,有的放失的開(kāi)發(fā)方法,后心中有數的完成分析工作。
賽默飛色譜柱的關(guān)鍵參數有固定相、內徑,長(cháng)度和液膜的厚度。
1)固定相
固定相由固體吸附劑或涂有固定液的擔體構成。擔體是一種多孔性化學(xué)惰性固體,用來(lái)支撐固定液。擔體的特性是表面積大、有化學(xué)惰性、熱穩定性,孔隙結構和浸潤性。擔體分為一般分硅藻土和非硅藻土兩大類(lèi)。
固定相一般是具有活性的多孔性固體的物質(zhì),主要有三類(lèi):吸附、高分子聚合物、化學(xué)健合固定相,由固定液涂敷在載體表面上。
常用的賽默飛色譜柱是化學(xué)健合固定相,主要是聚氧硅氧烷和聚乙二醇。選擇這類(lèi)色譜柱理論上遵循相似性原則,即非極性固定相分析非相性物質(zhì),極性固定相分析極性物質(zhì),含芳香基團的固定相分析芳香物質(zhì)。這類(lèi)固定相與分析物之間存在三種作用力:色散力、偶極力和氫鍵作用力。
2)內徑
毛細管柱的內徑直接影響到理論塔板數、分離度、保留時(shí)間和柱頭壓力等參數。
由理論公式可以得到,柱子內徑大小與柱效成反比,分離度與理論塔板數的平方根成正比,分析物的保留時(shí)間與柱子內徑成反比,柱頭壓力是柱內徑的負二次方函數,載氣的流量設置也會(huì )根據柱內徑進(jìn)行優(yōu)化。
柱子內徑常規有0.18 mm、0.25 mm、0.32 mm、0.53 mm,小內徑有較高的理論塔板數,但也會(huì )有較高的柱頭壓力。高載氣流速時(shí)使用大內徑的柱子,同時(shí)也會(huì )有較高的樣品容量。
3)液膜厚度
柱子液膜厚度影響分析物的保留特性、分離度、流失、惰性和容量。
一般情況,液膜厚度與保留時(shí)間成正比,對于低沸點(diǎn)的分析物,厚度越大保留越強。液膜厚度大的毛細管柱流失水平也高,同時(shí)惰性也強,使用較厚度液膜的柱子可以減少峰拖尾。
常規的液膜厚度有0.12μm、0.4μm、1.2μm、5.0μm,對于0.18~0.32mm 內徑的毛細管柱,一般膜厚為0.18~ 0.25μm,適用于大多數樣品分析。對于0.45~0.53mm 內徑的毛細管柱,一般膜厚為0.8~1.5μm,適用于大多數樣品分析。
4)長(cháng)度
毛細管長(cháng)度會(huì )影響柱效、分離度、保留時(shí)間和載氣壓力。柱子長(cháng)度與理論塔板數成正比,理論上增加柱子長(cháng)度可以增加分離度,也會(huì )增加保留時(shí)間。柱子的壓力與長(cháng)度成正比。
15m長(cháng)的毛細管柱用于簡(jiǎn)單分析物的分析,30m長(cháng)的毛細管柱可以用于30-50個(gè)組成的分析,更復雜的分析物可用大于50m毛細管柱。